Прошлой весной лаборатория контроля качества, в которой используются летучие вещества EPA 8260, позвонила мне по поводу неудачной последовательности. Их флаконы емкостью 2 мл были заполнены1,7 мл, автосамплер извлекали из пула объемом 200 мкл, и к инъекции 40 внутренняя стандартная реакция снизилась18%ниже калибровочной кривой. с инструментом ничего не было. флакон был рассчитан на образец, а не на количество инъекций, и перегородка была проколота достаточно раз, чтобы отверстие больше не закрывалось между вытяжками. В этом вся проблема в одном предложении: емкость бренда айдзирэн и срок службы проколов должны быть сопоставлены с количеством инъекций до первого запуска, а не после двадцатого.

Это руководство об арифметике. предполагает, что вы уже знаете, что такое линия айджирен и примерно какое размерное семейство подходит для вашего автосамплера. Что он охватывает, так это то, как выбрать объем наполнения, остаточный объем, игольный манометр и класс перегородки, чтобы флакон выжил при каждой инъекции, которую вы планируете сделать из него, с запасом.бренд айджиренкаталог печатает на коробке данные о емкости и перегородках; работа здесь - превратить эти цифры в решение.

Каждый флакон с автосамплером емкостью 2 мл, который я измерил, вмещает примерно от 2,2 до 2,4 мл до краев. Полезное количество меньше. Стандартный флакон размером 12 × 32 мм с горлышком диаметром 6 мм и наполнителем 40% имеет примерно1,5 млжидкости, оставляющей незаполненный объем около 0,7 мл. Это свободное пространство не тратится зря. Именно буфер позволяет игле автосамплера достигать жидкости, не втягивая перегородку в образец.

Ошибка, которую я вижу чаще всего, заполнение до плеча, потому что аналитик хочет "достаточно пробы". Две вещи идут не так. во-первых, игла, особенно игла фиксированной высоты на жидкостном манипуляторе, может опуститься до дна или сесть в конус и потянуть за собой пробку воздуха. во-вторых, если флакон закрыт крышкой и перегородка пробита с таким высоким наполнением, уровень жидкости может подняться в перегородку и смочить ее. Влажная перегородка - это протекающая перегородка.

Мое рабочее правило для флаконов айдзирен емкостью 2 мл на стандартном автосамплере - заполнениеот 0,8 до 1,2 млдля инъекции 10 мкл иот 1,0 до 1,4 млдля инъекции 1 мкл, где игла находится выше Верхняя граница устанавливается плечом, а не полями Нижняя граница устанавливается мертвым объемом, который является следующим разделом.

Мертвый объем и пол 150 мкл

Мертвый объем - это жидкость, из которой вы не можете выбраться. На флаконе размером 12 × 32 мм с горлышком диаметром 6 мм и конической внутренней частью остаточный объем под кончиком иглы обычно составляетот 100 до 200 мклв зависимости от того, где останавливается игла Если вы набираете 10 мкл на инъекцию и у вас есть 1,2 мл во флаконе, у вас есть 120 инъекций жидкости и около 100 инъекций, прежде чем игла начнет вытягивать воздух. Флакон не знает, сколько инъекций вы запланировали. Он знает только, сколько жидкости осталось над кончиком.

Вот тут начинается арифметика количества инъекций Если ваш метод принимает 10 мкл на инъекцию и вы хотите 50 инъекций из одного флакона, вам нужно500 мклиз вытягиваемой жидкости плюс мертвый объем плюс запас прочности То есть 500 + 150 + 100 =750 мклминимальное наполнение. Если ваш метод принимает 100 мкл на инъекцию, для 50 инъекций требуется 5 мл, которые не могут удерживаться ни одним флаконом емкостью 2 мл. Вам нужен флакон большего размера или инъекция меньшего размера.

Я храню на скамейке простую формулу:

Минимальное наполнение (мкл) = (объем инъекции × количество инъекций) + мертвый объем + запас 100 мкл
Для инъекции 10 мкл × 50 инъекций + 150 мкл мертвых + 100 мкл маржинального =750 мкл
Для инъекции 1 мкл × 100 инъекций + 150 мкл мертвых + 100 мкл маржинального =350 мкл

Если число выходит над линией плеч вашего флакона, вы не собираетесь решать его с большей заливкой. Вам нужен другой формат флакона, или вам нужно разделить пробег на два флакона. TheФлакон VOAформат - это обычный ответ, когда ограничение составляет сам объем выборки.

Жизнь после пункции - это счет, а не претензия

Срок прокола в перегородке указан в виде числа в таблице данных, и это число почти всегда является лучшим случаем. Обычно оценивается перегородка с силиконовым лицом и пленкой из ПТФЭ на колпачке диаметром 12 ммот 50 до 100 проколовна игле 22 калибра в чистых условиях. в реальных условиях, с иглой 20 калибра и образцом, который содержит немного матрицы, я бы не доверял этому прошломуот 30 до 40.

Арифметика, которая имеет значение, такова: проколы на флакон = инъекции на флакон. Если вы сделаете 40 инъекций из одного флакона, в перегородке будет 40 проколов плюс один на каждое стандартное добавление, плюс один на каждый раз, когда аналитик повторно вставит флакон. Серия из 40 инъекций с двумя стандартными добавлениями и одной повторной стойкой - это 43 прокола. Это внутри рейтинга 50 проколов, но за пределами моей зоны комфорта для иглы 20 калибра.

Игольный калибр меняет арифметику больше, чем большинство покупателей осознают. Игла 22 калибра имеет внешний диаметр около0,72 мм. 20-метровый калибр0,91 мм. Калибр 260,46 мм. Площадь прокола масштабируется с квадратом диаметра, поэтому калибр 20 делает отверстие примерно на 60% больше, чем калибр 22. Это большее отверстие закрывается медленнее и протекает больше между инъекциями. Если ваш метод позволяет использовать иглу калибра 22 или 23, используйте его. Срок прокола увеличивается примерно вдвое.

Тест повторного закрытия, который я провожу перед длинной последовательностью

Прежде чем я зафиксирую метод до 100 инъекций на одном флаконе, я провожу повторный тест. Заполните три флакона матрицей, закройте их перегородкой, которую планируете использовать, и проколоте один10 раз, один30 рази один60 разс собственно иглой. пусть они сидят 15 минут при комнатной температуре, затем взвешивают каждый на весах до 0,1 мг. флакон, потерявший более2 мгмасса имеет путь утечки. флакон, потерявший 5 мг или более, вообще не закрывается. Я видел, как игла 20 калибра на тонкой силиконовой перегородке потеряла8 мгпосле 40 проколов, чего достаточно, чтобы сдвинуть результат свободного пространства.

В частности, для перегородоксептаи сочетание колпачка имеет большее значение, чем только перегородка. колпачок, который не сжимает перегородку равномерно, будет протекать на краю, прежде чем он протечет в месте прокола.флакон септапрежде чем выбирать крышку, стоит прочитать ссылку на сжатие и крутящий момент.

Крутящий момент и сжатие колпачка решают, действительно ли количество проколов

Я наблюдал, как покупатель указал 100-прокол перегородки и затем вручную обжимать колпачки с дешевой обжимной установкой на все, что было туго. результатом была утечка на краю колпачка путем инъекции 15. перегородка была в порядке. Уплотнение не было.

Для обжимного колпачка диаметром 11 мм на флаконе размером 12 × 32 мм обжим должен сжать перегородку примерно на 10 ммот 20 до 25%из толщины. перегородка 1,0 мм должна оказаться под колпачком на 0,75 - 0,80 мм. Слишком мало сжатия и перегородка рыхлая; слишком много и силикон предварительно напрягается и расщепляется при проколе. динамометрический ключ на завинчивающейся крышке легче контролировать, чем ручной обжим. для завинчивающихся крышек 9 мм я устанавливаю крутящий момент наот 0,8 до 1,2 Н·сми проверяйте с помощью тестера крутящего момента каждые 50 колпачков. для обжимных колпачков диаметром 11 мм я проверяю высоту обжима с помощью суппорта и отвергаю все, что есть снаружи±0,1 мм.

Если вы запускаете длинную последовательность и не проверяете сжатие колпачка, вы угадываете срок службы прокола. Число в техническом описании предполагает правильно запечатанную крышку. Число, которое вы получите в лаборатории, зависит от обжимного устройства.

Таблица принятия решений по количеству инъекций в сравнении с форматом флакона

Вот таблица, которую я использую, когда лаборатория спрашивает, какой формат айджирен купить для данного количества инъекций. Цифры предполагают иглу 22 калибра, правильно обжатую крышку и матрицу, которая не является необычно агрессивной.

Объем инъекции	Планируемые инъекции на флакон	Минимальное наполнение (мкл)	Рекомендуемый формат	Степень септума
1 мкл	50	350	2 мл, 12×32 мм, горлышко 6 мм	Стандартный силикон/ПТФЭ, калибр 22
1 мкл	100	350	2 мл, но разделить на 2 флакона по 50 штук в каждом	Стандартный силикон/ПТФЭ
10 мкл	50	750	2 мл, 12×32 мм	Стандартный силикон/ПТФЭ
10 мкл	100	1,250	2 мл, наполните до 1,3 мл, разделите на 60	Премиум силикон/ПТФЭ, калибр 23
100 мкл	20	2,250	Флакон VOA емкостью 4 мл или 10 мл	Стандартный силикон/ПТФЭ
100 мкл	50	5,150	Флакон VOA 10 мл	Стандартный силикон/ПТФЭ

Стол не заменяет тест повторного запечатывания, но он вводит вас в правильный формат, прежде чем тратить деньги. ряд 10 мкл × 100 - это тот, который ловит людей. Флакон объемом 2 мл не может вместить 1250 мкл и при этом оставить свободное пространство, поэтому ответ - либо флакон большего размера, либо два флакона по 60 инъекций каждый. Разделение серии дешевле, чем покупка новой стойки для автосамплера.

Полевой случай: дрейф 18%, который был проблемой заполнения

Лаборатория из отверстия имела флакон айджирен 2 мл, наполнитель 1,7 мл, и бассейн для вытягивания 200 мкл. Внутренний стандарт упал на 18% путем инъекции 40. первое, что я проверил, это перегородка, и она была неповрежденной. второе, что я проверил, это уровень наполнения, и это была проблема. На 1,7 мл жидкость была над плечом, и игла автосамплера вытягивалась из бассейна, в котором было меньше150 мклзапас над кончиком при инъекции 40. Игла вытягивала смесь жидкости и пара свободного пространства, что разбавляло внутренний стандарт.

Фиксирование не было новой перегородкой Это была заливка 1,2 мл и перестойка при 30 инъекциях Дрейф ушел Урок заключается в том, что объем заполнения, который выглядит щедрым в начале последовательности, становится проблемой мертвого объема в конце, и количество инъекций - это то, что говорит вам, где конец.

Полевой случай: потеря массы на 8 мг, которая была проблемой игольчатого датчика

Другая лаборатория работала над свободным пространством на флаконах емкостью 20 мл с иглой калибра 20 и силиконовой перегородкой диаметром 1,0 мм. Их результаты были хорошими для первых 20 инъекций, а затем дрейфовали. Повторный тест показал8 мгпотери массы после 40 проколов Игла 20 калибра сделала отверстие слишком большим, чтобы силикон мог закрыться Переключение на иглу 23 калибра и перегородку 1,5 мм привело к снижению потери массы1 мгпри 60 проколах. количество инъекций не изменилось. Игла изменилась.

Это часть жизни пункции, что техническое описание не говорит вам. Оценка для игольного калибра и толщины перегородки. Измените либо один и число движется. если ваш метод использует иглу 20 калибра, потому что образец вязкий, вам нужна более толстая перегородка или более короткая последовательность, и вам нужно сказать это в методе.

Соответствие сорта перегородки количеству инъекций, а не цене

В линии айдзирен я вижу три степени перегородки, и правая зависит от того, сколько проколов вы планируете и как долго флакон находится на автосамплере.

Стандартный силикон/ПТФЭ:оценено от 50 до 100 проколов на игле 22 калибра. хорошо для последовательностей до 40 инъекций. пленка из ПТФЭ обращена к образцу и защищает его от силикона. это по умолчанию для большинства работ ВЭЖХ и ГХ.
Премиум силикон/ПТФЭ с более толстым слоем силикона:оценила от 100 до 150 проколов. хорошо для последовательностей до 80 инъекций. дополнительная толщина стоит примерно на 20% больше за колпачок и стоит того, когда вы пытаетесь избежать перестойки в середине последовательности.
Биметаллические или слоистые перегородки:используется, когда образец вступает в реакцию с силиконом или когда температура выше 100 °C. Срок прокола короче, обычно от 30 до 50, потому что слои разделяются при проколе. Не используйте их для длинных последовательностей, если вы их не протестировали.

Температура также меняет арифметику. Перегородка при 40 °C закрывается медленнее, чем перегородка при 20 °C, а флакон с свободным пространством при 80 °C - другое животное. Если ваш метод нагревает флакон, уменьшите срок службы прокола на 20 °Cот 30 до 40%. Перегородка на 100 пунктов при комнатной температуре представляет собой перегородку на 60 пунктов при 80 °C. TheТермофишеровская хроматография и обработка пробв справочнике есть хорошая таблица поведения перегородки при температуре, если вам нужны основные данные.

Контрольный список перед запуском, который предотвращает повторную трековку

Прежде чем последовательность идет на инструмент, я запускаю этот контрольный список, Это занимает пять минут и он улавливает большинство неудач, которые я описал.

Объем наполнения:измерено с градуированным цилиндром на трех флаконах, без глаз. Цель составляет от 0,8 до 1,4 мл для флакона емкостью 2 мл, а верхняя часть жидкости находится ниже плеча.
Мертвый том:кончик иглы находится на высоте не менее 2 мм над дном флакона, а остаточный объем над кончиком составляет не менее 150 мкл в конце последовательности.
Количество инъекций:инъекции на флакон × объем инъекции + мертвый объем + запас 100 мкл меньше объема наполнения. Если нет, разделите серию.
Игольчатый калибр:22 или 23 калибра, если образец не требует большего размера. 20 калибр сокращает срок службы прокола вдвое.
Степень септума:соответствует количеству инъекций и температуре. Датировать на 30-40%, если флакон нагревается.
Сжатие крышки:высота обжима в пределах ±0,1 мм, или крутящий момент завинчивающейся крышки при 0,8 до 1,2 Н·см. Проверяется каждые 50 крышек.
Повторный тест:три флакона проколоты 10, 30 и 60 раз, весили до 0,1 мг. Потеря массы менее 2 мг приемлема.

Если какая-либо строка выходит из строя, исправление обычно представляет собой заливку меньшего размера и повторную стойку, а не новый флакон. TheМетоды испытаний SW-846 Агентства по охране окружающей среды СШАустановите требования к контейнерам для летучих веществ, а номера наполнения и свободного пространства в этих методах - это пол, а не потолок. Ваш метод может быть более плотным.

Что я говорю лаборатории, которая собирается купить 10 000 флаконов

Сначала сделайте арифметику. Возьмите объем инъекции, запланированные инъекции на флакон и мертвый объем и поместите их в формулу. Если для флакона емкостью 2 мл это число превышает 1,4 мл, вы покупаете неправильный формат. Если это число ниже 0,8 мл, вы теряете емкость и вам следует разделить пробег на большее количество флаконов, а не на меньшее.

Затем сделайте повторный тест на фактической игле и фактической перегородке. подсчет проколов в таблице данных является отправной точкой, а не спецификацией. Игла 22 калибра на стандартной перегородке из силикона/ПТФЭ даст вам от 40 до 50 надежных проколов. Игла 20 калибра на той же перегородке даст вам от 20 до 25. разница не во флаконе. Это игла.

Для лаборатории, выполняющей 100 инъекций в последовательности, правильный ответ обычно два флакона по 50 инъекций каждый, наполнение 1,2 мл, игла 22 калибра и стандартная перегородка. Эта комбинация дешева, ее можно повторить, и она не зависит от номера таблицы данных, который был измерен в условиях, которые вы никогда не увидите.Агилентные колонки и аксессуары GCдокументация иТехнические ресурсы Рестекв обоих есть полезные таблицы совместимости игл и перегородки, если вы хотите сверить свою арифметику со вторым источником.

Правило принятия решения таково: размер флакона таким образом, чтобы объем наполнения был, по крайней мере, в объеме инъекции, умноженном на количество инъекций плюс мертвый объем плюс 100 мкл, и размер перегородки таким образом, чтобы количество проколов было, по крайней мере, количеством инъекций плюс 20%. запас при фактическом уровне иглы и температуре. Если эти два числа не соответствуют имеющемуся у вас флакону, измените формат флакона или разделите серию. Не меняйте наполнения и надежды.